ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ И ИССЛЕДОВАНИЯ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ ПРОСТЕЙШИХ КИШЕЧНИКА

Наиболее распространенными и эффективными методами диагностики кишечных протозойных инвазий и исследования простейших кишечника являются:

1. Протозооскопия — исследование с помощью обычного и фазовоконтрастного микроскопа нативных мазков, а также обработанных и окрашенных гистологическими красками так называемых постоянных препаратов.

2. Культивирование — посев материалов на питательные среды и микроскопическое исследование их после инкубирования в термостате.

3. Иммунологические методы — постановка реакций связывания комплемента (PCK) и преципитации с сывороткой крови больного и антигенами из простейших, внутрикожные пробы, метод флюоресцирующих антител.

4. Заражение лабораторных животных.

Протозооскопия. Метод этот наиболее простой, быстрый, доступный и вместе с тем эффективный, а потому чаще всех других применяется в практических лабораториях.

а) Приготовление и исследование нативных мазков. Нативные мазки исследуют необработанными или обработанными различными красящими веществами, чаще всего йодом. Готовят нативный мазок следующим образом. Ha предметное стекло наносят большую каплю исследуемого жидкого материала — водянистых или слизистых фекалий, содержимого двенадцатиперстной кишки, гноя, крови, мокроты. Каплю покрывают тщательно очищенным покровным стеклом, которое удерживают за ребрышки, во избежание загрязнения. Если исследуемый материал густой и недостаточно прозрачный, то на предметное стекло предварительно помещается капля физиологического раствора. Затем при помощи деревянной лучинки (или стеклянной палочки, что менее удобно) длиной до 15 см и толщиной 2—4 мм в этой капле готовят равномерную не слишком густую, но достаточно насыщенную взвесь исследуемого материала, которую покрывают покровным стеклом. Для приготовления взвеси стараются выбрать комочки слизи, прожилки крови и другие патологические элементы, если они имеются.

Одна из конструкций нагревательного столика-термостата, предложенная Д. В. Волжинским (1950), представляет собой металлический цилиндрический корпус, соответствующий по размерам и форме предметному столику микроскопа МБИ-1 и аналогичных ему. Корпус устанавливается вместо предметного столика на этих микроскопах. B основании корпуса имеется круглое стеклянное окно; через него из конденсора направляется свет для освещения

Рис. 10. Микроскоп с нагревательным столиком.

I — корпус столика; 2 — крышка корпуса; 3 — подвижный диск со сменной объективной втулкой; 4—рамка для предметного стекла; 5 — наружная часть колодки; 6 — термометр; 7 — электропровод к трансформатору; 8 — отверстие для объектива.

препарата. Сверху корпус герметически закрывается крышкой, благодаря чему создается замкнутая камера для исследуемого препарата. Крышка снабжена подвижным диском со сменной втулкой для объектива, что дает возможность просматривать весь препарат. Для этого последний вместе с рамкой для предметного стекла помещают в камеру через специальную прорезь в боковой стенке столика-термостата. B корпус столика вмонтирован электронагреватель, закрытый панелью, на которой укреплен терморегулятор. Нагреватель соединен проводами с трансформатором и реле, находящимися отдельно в упаковочном ящике, служащем также для хранения столика-тер-

мостата в нерабочем состоянии. Столик может присоединяться к электросети напряжением 127 и 220 В.

Внутри корпуса располагается колодка с лупками для воды. Испарение ее создает высокую влажность в камере, что предохраняет изучаемый препарат от высыхания.

Для микроскопического изучения препарата объектив микроскопа вводится в отверстие подвижного диска крышки. При малом диаметре оправы объектива в отверстие предварительно вставляют переходную втулку *.

При отсутствии столика-термостата можно осторожно подогревать препарат над электрической лампой, над пламенем спиртовки или даже на тыльной стороне кисти исследователя. Подогретый препарат быстро устанавливают на предметный столик и исследуют, как обычно.

Bce простейшие кишечника и их цисты в нативных неокрашенных мазках бесцветны и отличаются от окружающей среды лишь по светопреломляемости. Однако вегетативные формы обладают характерной для каждого вида подвижностью, что позволяет легко обнаруживать их. Внутренняя структура живых вегетативных форм более отчетливо выявляется при так называемом витальном окрашивании растворами кислых или основных красителей в физиологическом растворе хлористого натрия. Из кислых красителей хорошие результаты дает трипановый синий (1:5000—1:10 000), из основных — янусовый зеленый (1:10 000— 1:500000), нейтральный красный (1:200000), метиленовый синий (1:1000—1:10000). Препараты для исследования с витальными красителями готовят и микроскопируюттак же, как и с физиологическим раствором.

Нативный мазок, обработанный йодом, приготовляется так же, как и мазок с физиологическим раствором, но вместо последнего используют модифицированный раствор Люголя.

Приготовление и состав раствора Люголя: в нескольких миллилитрах дистиллированной воды растворяют 2 г йодистого калия, добавляют 1 г кристаллического йода, который также растворяется, после чего раствор доливают дистиллированной водой до 75 мл. Хранят его в склянках темного стекла с притертой пробкой.

Окрашивание простейших в йодном мазке происходит уже через 1—2 мин после приготовления. B йодных препаратах легко распознаются цисты простейших, так как йод избирательно окрашивает ядерные структуры, гликогеновые вакуоли, различные фибриллярные образования и другие внутренние включения. B нативных неокрашенных мазках цисты большинства простейших имеют вид бесструктурных бесцветных пузырьков и идентифицировать их почти невозможно. Растворы йода убивают вегетативные формы простейших, последние обездвиживаются, деформируются и поэтому заметить их в йодных препаратах, наоборот, труднее, чем в мазках с физиологическим раствором.

Микроскопическое исследование мазков производится сначала при малом увеличении (объективы 8—10, окуляр 10). Крупные оживленно подвижные виды простейших, например Balantidium coli, легко обнаружить и распознать уже при этом увеличении. Для определения мелких простейших других видов требуется исследование при большом увеличении без иммерсии (объектив 40, окуляр 10). Исследование нативных мазков с иммерсионным объективом неудобно и применяется редко.

При микроскопировании нативных мазков обращают внимание на форму, особенности движения простейших, наличие и характер включений и другие детали. B мазках, окрашенных раствором Люголя, обращают внимание на форму тела, а также особенности строения и число ядер в цистах, наличие и форму парабазальных тел, различных фибрилл, размеры, форму, интенсивность окраски гликогеновых вакуолей.

Изучение живых простейших производится также методами фазово-контрастной микроскопии и аноптральной микроскопии, подробное описание которых дается в специальных руководствах по микроскопической технике.

б) Методы концентрации цист (методы обогащения). При скудном содержании цист простейших в исследуемом материале применяют различные методы концентрации их, основанные на всплывании цист в растворах с высоким удельным весом (флотация) или осаждении в жидкостях с низким удельным весом. Эти методы получили также название методов обогащения. Наиболее распространенными из них являются следующие.

Флотация сернокислой медью. Суспензию фекалий в водопроводной воде (1 : 10) процеживают через металлическое сито или один слой марли в центрифужную пробирку до 10 мл и центрифугируют 3—4 раза по 1 мин, при 1500—2000 об/мин, заменяя каждый раз 2—3 мл надосадочной жидкости соответствующим объемом чистой воды, с которой осадок смешивается энергичным встряхиванием. Затем к осадку добавляют 2—3 мл насыщенного раствора медного купороса (сернокислая медь, удельный вес 1,2). Содержимое пробирки тщательно перемешивают, пробирку доливают до краев и центрифугируют 1 мин.

Флотация сернокислым цинком производится так же, как и с медным купоросом. Флотирующая жидкость — 33% раствор сернокислого цинка (удельный вес 1,18).

Рис. 3. Стадии развития малярийных плазмодиев в мазкс крови (по H. А. Деминой, 1968).

/ — кольцо; 2—3 — шизонты; 4—морула; 5 — макрогаметоцит; Р'—микрогаметоцит.

Рис. 4. Стадии развития малярийных плазмодиев в толстой капле (по H. А. Кассирскому и H. H. Плотникову, 1959; H. А. Деминой, 1968). Возбудители: трехдневной